تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B)

تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B) – ایران ترجمه – Irantarjomeh

مقالات ترجمه شده آماده گروه پزشکی

مقالات ترجمه شده آماده کل گروه های دانشگاهی

مقالات

اطمینان از کیفیت خارجی بین المللی  برای شناسایی آزمایشگاهی و تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B)

چکیده

ما نتایج حاصل از اولین مطالعات ارزیابی کیفیت خارجی چند مرکزی بین المللی (EQA) برای تشخیص تیپ سرولوژیک و مولکولی گونه های استرپتوکوک گروه B (GBS)، به عنوان بخشی از برنامه DEVANI ( طراحی نوعی واکسن در مقابل عفونتهای نوزادی) تحت عنوان یک برنامه پان- اروپایی، را گزارش می کنیم. یک بررسی، بر اساس پرسشنامه در بین هشت آزمایشگاه شرکت کننده در DEVANI و شش آزمایشگاه دیگر، که در DEVANI شرکت نداشتند، از ۱۳ کشور انجام شد تا رویه های میکروبیولوژی فعلی آنها برای غربالگری، مشخص سازی و تشخیص تیپ GBS مورد بررسی قرار گیرد. خصوصیات گونه های GBS از سه توزیع EQA با استفاده از روشهای سرولوژیک و مولکولی که بر اساس تشخیص تیپ پلی ساکارید پوششی GBS بودند تعیین شد. از شرکت کنندگان خواسته شد توزیع اولی را با استفاده از روشهای سرولوژیک تیپ و ژنوتشخیص تیپ فعلی خود آزمایش کنند. روش چسبندگی استرپ- B– لاتکس پرکاربردترین روش بود؛ مقدار توانایی تشخیص تیپ این روش بیش از ۹۰% بود. روش بررسی PCR مرکب برای تشخیص تیپ ژنهای پوششی GBS نیز توسط ۲ تا از ۱۴ مرکز مورد استفاده قرار گرفت، که به مقدار توانایی تشخیص تیپ ۹۳% نیز دست یافت؛ این روش تنها ۹ مورد از ۱۰ ژن پوششی پلی ساکارید GBS را شناسایی کرد. از مطالعات دوم و سوم EQA، پروتکل های استانداردی برای تشخیص تیپ سرولوژیک و مولکولی گونه های GBS  بر اساس روش چسبندگی استرپ- B– لاتکس و یک روش نوین برای PCR مرکب که هر ۱۰ نوع ژن پوششی  GBS (Ia-IX) را شناسایی می کرد، تهیه شدند. این پروتکل های استاندارد درحال حاضر مورد استفاده بسیاری از آزمایشگاههای اروپایی قرار می گیرد، و با افزایش استفاده از این روشها، بهبود مستمر و بررسی عملکرد آزمایشگاهها و آموزش دادن به آزمایشگاههایی که مشکلات فنی دارند ضرورت می یابد.

تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B)

مقدمه

استرپتوکوک آگالاکتیه ( استرپتوکوک گروه B (GBS) یکی از دلایل اصلی عفونتهای نوزادی، مننژیت و ذات الریه است که  ۰٫۵ تا ۲  نوزاد در هر ۱۰۰۰ تولد در اروپا را  تحت تأثیر  قرار  می دهد. هر چند ظرفیت واقعی بیماری GBS در نوزادان می تواند به مراتب بیشتر از آنچه در برخی مطالعات اروپایی گزارش شده است باشد. نرخ مرگ و میر ناشی از بیماری GBS در نوزادان بین ۴ و ۱۰ % برآورد می شود. بیماری GBS نوزادان می تواند در ۶ روز اول زندگی (بیماری زود هنگام ( EOD)) یا در یک هفتگی تا ۳ ماهگی ( بیماری دیرهنگام (LOD)) اتفاق افتد. از سال ۱۹۹۶ در ایالات متحده بعد از اجرای دستورالعمل های غربالگری که به توصیه مراکز کنترل و پیشگیری بیماری (CDC) انجام شد و نیز استفاده از آنتی بیوتیک های پیش گیری کننده نرخ بیماری EOD به طور قابل توجهی از ۱٫۷ در ۱۰۰۰ تولد به ۰٫۳۴ در ۱۰۰۰ تولد کاهش یافته است ( ۷۰% کاهش). در مقابل، بهترین استراتژی در کشورهای اروپایی هنوز اهمیت دادن به دیابت می باشد. برای مقایسه معتبر بین کشورها به داده های معتبر و قابل اعتماد نیاز است.

رده بندی سرولوژیک GBS بر اساس شناسایی پلی ساکاریدهای پوشش (CPS) و آنتی ژنهای پروتئین می باشد. CPS در بیماری زایی GBS نقش مهمی دارد و از آنجا که پادتن ها در مقابل نوعی CPS نوعی محافظت خاص ایجاد می کنند، اصولاً یک هدف ایده آل برای اکثر واکسینه های آزمایشی GBS محسوب می شود. در حال حاضر، GBS را می توان به ۱۰ سروتایپ CPS مجزا (I_a,I_b,II,Ix) تفکیک کرد و توزیع آنها در سراسر جهان گسترده شده است. برای انتخاب و توسعه واکسن های خونی در یک منطقه جغرافیایی خاص داشتن اطلاعات در مورد توزیع گروههای خونی ضروری است؛ لذا وجود یک روش استاندارد برای شناسایی هر ۱۰ نوع پلی ساکارید پوششی GBS که سریع ، معتبر و قابل تکثیر باشد برای مطالعات اپیدمولوژی در سراسر اروپا و متعلقات سودمند خواهد بود.

تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B)

مواد و روشها

شرکت کنندگان.۱۴ مؤسسه از ۱۳ کشور؛ بلژیک، بلعارستان، کانادا، جمهوری چک، دانمارک، فرانسه، آلمان، اسرائیل، ایتالیا، نروژ، اسپانیا و انگلستان در توزیع اولیه EQA شرکت کردند. دانمارک دو مرکز داشت. توزیع سوم EQA تنها برای هشت آزمایشگاه DEVANI آزاد بود. اکثر این آزمایشگاهها مراکز مرجع استرپتوکوکی ملی هستند. این مطالعات توسط واحد مرجع دیفتری و استرپتوکوک (SDRU)، آزمایشگاه عفونت و تنفس، بخش خدمات میکروبیولوژی آژانس مراقبت بهداشتی (HPAMSD)، لندن و انگلستان هماهنگ می شدند.

ارزیابی پرسشنامه. یک پرسشنامه برای ارزیابی رویه های میکروبیولوژی برای تشخیص، غربالگری و تشخیص تیپ استرپتوکوک گروه B در مدت زمانی آوریل تا ژولای سال ۲۰۰۸ به مراکز DEVANI و غیر DEVANI فرستاده شد. این پرسشنامه اطلاعات جزئی در مورد سطح خدمات مرجع ارائه شده و سیاستهای غربالگری GBS ملی برای زنان در حین بارداری یا در زمان زایمان و روشهای آزمایشگاهی موجود که برای غربالگری و تشخیص تیپ GBS وجود دارد پرسش می کند.

ایزوله های باکتریایی و انتقال . ایزوله های GBS از ایزوله های بالینی بایگانی شده که توسط آزمایشگاه بیمارستانی در انگلیس و ویلز به واحد مرجع دیفتری و استرپتوکوک ، کلونیدال HPAMSD، انگلستان و گونه های مرجع گروه خونی GBS از سال ۲۰۰۷ تا ۲۰۰۹ ارائه شده بودند، انتخاب شدند.

تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B)

نتایج

نتایج حاصل از پرسشنامه ها. تمام هشت مرکز DEVANI و شش مرکز غیر DEVANI پرسشنامه ها را تکمیل کرده و تا آگوست ۲۰۰۸ آنها را به مرکز هماهنگ کننده بازگرداندند.

(۱) جزئیات خدمات ارائه شده. ۹ تا از ۱۴ آزمایشگاه بلژیک، بلغارستان، کانادا، جمهوری چک، دانمارک، اسرائیل، نروژ، فرانسه و انگلستان مراکز مرجع استرپتوکوک ملی در کشور خود را به این پروژه اختصاص دادند. دو مرکز از جمهوری چک و انگلستان نیز مراکز WHO را برای تحقیق و ارجاع برای استرپتوکوک اختصاص دادند.  به جز مراکز کشورهای آلمان، یونان و اسپانیا، ۱۱ تا از ۱۴ مرکز خدمات مرجع استرپتوکوکی را برای کل کشور خود ارائه دادند، که سه تا از آنها ( از جمهوری چک، دانمارک و انگلستان) نیز خدمات مرجع خود برای کاشت استرپتوکوکی از سایر کشورها ارائه کردند. اکثر کشورها، به جز کانادا، ایتالیا و یونان بررسی های ملی روتینی برای بیماری تهاجمی GBS انجام دادند.

طیف خدمات تشخیص و ارجاع استرپتوکوک گروه B که توسط آزمایشگاهها ارائه می شود در برگیرنده شناسایی کشت GBS ، آزمایش مستعد بودن از نظر آنتی میکروبی ( توزیع اسکی و Etest ها ) ، آزمایشات CAMP، آزمایش تشخیص PCR زمان واقعی، تعیین ژنوتایپ برای ژنهای مقاوم ماکرولاید، تشخیص تیپ پلی ساکارید پوششی و تشخیص تیپ پروتئین سطحی از طریق PCR و آنتی سرم های خانه داری و سایر روشهای تعیین ژنوتایپ ( PFGE و MLST) می باشد.

(۲) سیاست های غربالگری GBS برای زنان در حین بارداری یا هنگام زایمان. پرسشنامه ها نشان داد که در حال حاضر در اروپا اکثر کشورها به جز بلغارستان، دانمارک، یونان ، نروژ و انگلستان برای GBS در هفته ۳۵ تا ۳۷ بارداری یک غربالگری عمومی پیش از تولد دارند. در این کشورها بر اساس توصیه های ملی برای پیشگیری از EOD و GBS آنتی بیوتیک های پیشگیری کننده توصیه شده و باید برای تمام زنان بارداری که شرایط زیر را دارند اجرا شود:

تشخیص تیپ استرپتوکوک آگالاکتیه (استرپتوکوک گروه B)

تحلیل نتایج

ما اولین مطالعات EQA چند مرکزی بین المللی در مورد روشهای تشخیص تیپ سرولوژیک و مولکولی گونه های GBS را توصیف نموده ایم. هدف ما تعیین رویه های آزمایشگاهی موجود برای تشخیص تیپ مولکولی و سرولوژیک گونه های پوششی GBS و نیز تست توانایی مراکز شرکت کننده در تعیین صحیح نوع گونه های GBS با استفاده از این روشها بود. نتایج حاصل از این مطالعات EQA ما را قادر ساخت روشهای تشخیص تیپ مولکولی و سرولوژیک را برای بررسی های مربوط به عفونتهای نوزادی GBS در اروپا مقایسع، هماهنگ و استانداردسازی کنیم.

در توزیع اول EQA از مراکز شرکت کننده خواستیم یک پانل GBS را با استفاده از روشهای فعلی خود برای تشخیص تیپ GBS بررسی کنند. از بین روشهای تشخیص تیپ، تشخیص تیپ سرولوژیک بر اساس روش چسبندگی استرپ-B – لاتکس تجاری بیش از همه مورد استفاده قرار گرفت، که مقدار توانایی تشخیص تیپ آن بیش از ۹۰% است. این مطالعه نشان داد که بسیاری از آزمایشگاههای اروپایی از این روش استفاده می کنند؛ چرا که سریع است، انجامش آسان است و قابل تکثیر است. واکنشگرهای پادسرمی تولید کننده ارائه کرده در مقابل هر ۱۰ نوع گونه خونی GBS اعتبارسنجی شده است تا از هم برکنش موازی بین برخی واکنشگرهای پادسرم جلوگیری شود. علاوه بر اینها، این روش می تواند برای ارتقاء واکسن ها و بررسی های مراقبتی سودمند باشد؛ چرا که گونه های GBS که از نظر سرولوژیک غیرقابل تشخیص تیپ هستند را نیز شناسایی می کند. گونه های غیرقابل تشخیص تیپ اغلب ژنهای CPS دارند، اما تولیدکنندگان سطح پایینی هستند یا ممکن است ساختارهای کپسولی اصلاح شده داشته باشد که موجب می شود با پادسرم هیچ یک از ۱۰ گروه خونی شناخته شده واکنش ندهند.

ظرفیت واقعی بیماری GBS ممکن است به مراتب بیش از آنچه در برخی مطالعات اروپایی گزارش شده است باشد. برای افزایش اطلاعات اپیدمولوژی در سراسر اروپا باید تلاشهای بیشتری صورت گیرد.  کابرد این رویه های میکروبیولوژیکی هماهنگ برای تعیین خصوصیات GBS و توصیه های موجود برای غربالگری GBS در کشورهای اروپایی باید این اطمینان را به ما بدهد که میزان شیوع و توزیع سروتایپ بیماری GBS سریع و دقیق ارزیابی شده و بهترین استراتژی پیشگیری در سراسر اروپا به کار می رود،  و همچنین این رویه ها باید استراتژی های واکسیناسیون فعلی و آتی را به صورت دقیق اطلاع رسانی کنند.